การพัฒนาชุดทดสอบและวิเคราะห์ปริมาณสารเมลาโทนินสำหรับสายการผลิตผลิตภัณฑ์อาหาร = The development of melatonin detection and quantification methods for food processing / Pongsathon Phapugrangkul [et al.] (CONFIDENTIAL)
โดย: Pongsathon Phapugrangkul
ผู้แต่งร่วม: Pongsathon Phapugrangkul | Siwat Thaiudom | Amorn Owatworakit | Duangkamol Charoenwong | Nuttapon Vachiraroj | Yuwada Rungrote | Vorawan Keeratimaneekorn | Ghit Laungsopapun | Sayan Tanpanich | Bundit Fungsin | พงศธร ประภักรางกูล | ศิวัฒ ไทยอุดม | อมร โอวาทวรกิจ | ดวงกมล เจริญวงศ์ | ณัฐพล วชิรโรจน์ | ยุวดา รุ่งโรจน์ | วรวรรณ กีรติมณีกร | กฤษ เหลืองโสภาพันธ์ | สายันต์ ตันพานิช | บัณฑิต ฝั่งสินธุ์
BCG: อาหาร TRM: อาหาร ข้อมูลการพิมพ์: Pathumthani : Thailand Institute of Scientific and Technological Research, 2024 รายละเอียดตัวเล่ม: 61 p. : ill., tables ; 30 cm.ชื่อเรื่องอื่นๆ: โครงการวิจัยที่ ภ.60-25 การวิจัยและพัฒนาผลิตภัณฑ์สุขภาพจากธรรมชาติเพื่อคลายเครียดจากแหล่งสมุนไพรไทย
หัวเรื่อง: เมลาโทนิน | เทคนิคโครมาโทกราฟี | เทคนิคอีไลซา (ELISA)สาระสังเขป: Reliable detection and quantification methods of ingredients are important for food processing. Melatonin (N-acetyl-5methoxytryptamine) occurs widely in many kinds of food including meat, fish, egg, milk, plants, rice and fruits. Melatonin plays an important role in the regulation of sleep cycles, immune functions and blood pressure and also has antioxidant capabilities. Various methods are used to determine melatonin concentration such as high-performance liquid chromatography (HPLC) and gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS). Both techniques are high-cost and not suitable for analyzing colloid samples such as milk. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) can be used for colloid samples but this is also expensive and time consuming. Thus, a fast and reliable method for melatonin detection was developed. Immunogenic melatonin was prepared by coupling melatonin with carrier protein as bovine serum albumin (BSA) using the Mannich reaction. The melatonin-BSA (Mel-BSA) coupling was then evaluated by Fourier-transform infrared spectroscopy (FTIR), sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE), Western blot analysis and HPLC. Results showed that melatonin covalently bound with BSA. After rabbit immunization using Mel-BSA, the purified antibody was used to construct a drop test immunoassay for melatonin detection. Under optimized condition, the limit of detection was shown to be 0.15 ng/ml with a turnaround time of about 20 minutes. This drop test immunoassay is a promising approach for development of a more rapid, robust and cost-effective tool for melatonin detection. สาระสังเขป: เมลาโทนินเป็นสารที่พบทั่วไปในอาหารหลายๆ ชนิด เช่น เนื้อ ปลา ไข่ นม พืชต่างๆ เช่น ข้าว และผลไม้ เมลาโทนินมีความสำคัญในการควบคุมกระบวนการนอนหลับ ระบบภูมิคุ้มกัน และความดันของระบบโลหิต รวมทั้งมีฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระ การวิเคราะห์หาปริมาณเมลาโทนินทำได้หลายวิธี เช่น การใช้เทคนิคโครมาโทกราฟีของเหลวสมรรถนะสูง (HPLC) และแก๊ส
โครมาโทรกราฟี-แมสสเปคโทรมิเตอร์ (GC-MS) แต่ทั้ง 2 วิธี นี้มีค่าใช้จ่ายในการวิเคราะห์สูง และไม่สามารถใช้วิเคราะห์ตัวอย่างที่เป็นสารแขวนลอย เช่น นมโค ได้ในขณะที่เทคนิคอีไลซา (ELISA) สามารถวิเคราะห์ตัวอย่างที่เป็นสารแขวนลอยได้แต่วิธีนี้ก็ใช้เวลานาน และต้องพึ่งพาเครื่องมือในการอ่านผล ตลอดจนต้องมีผู้เชี่ยวชาญในการแปลผลวิเคราะห์ ดังนั้นการศึกษานี้จึงมุ่งที่จะพัฒนาวิธีวิเคราะห์สารเมลาโทนิน ด้วยวิธีที่เร็ว เชื่อถือได้ และอ่านผลง่ายด้วยตาเปล่า โดยเริ่มจากการผลิตสารกระตุ้นภูมิคุ้มกันต่อเมลาโทนิน ซึ่งเตรียมขึ้นจากการเชื่อมต่อเมลาโทนินเข้ากับโปรตีนพาหะที่เรียกว่าโปรตีน BSA โดยอาศัยปฏิกิริยาแมนนิช หลังจากนั้นจะทำการวิเคราะห์ความสำเร็จในการเชื่อมต่อเมลาโทนินและโปรตีน BSA (Mel-BSA) โดยใช้เทคนิคฟูเรียร์ทรานส์ฟอร์มอินฟราเรดสเปคโทรมิเตอร์ (FTIR), การแยกโปรตีนโดยเทคนิค SDS-PAGE, เทคนิคการเคลื่อนย้ายโปรตีนออกจากเจลไปยังแผ่นไนโตรเซลลูโลส (Western blot) และเทคนิคโครมาโทกราฟีของเหลวสมรรถนะสูง (GC) ผลการวิเคราะห์ยืนยันว่าการเชื่อมต่อสารทั้งสองชนิดด้วยปฏิกิริยาแมนนิชทำได้เป็นผลสำเร็จ หลังจากฉีดกระตุ้นระบบภูมิคุ้มกันในกระต่ายด้วยสาร Mel-BSA จนครบกำหนดแล้ว จึงนำแอนติบอดีที่ได้ไปทำบริสุทธิ์ก่อนนำไปใช้ในการสร้างชุดทดสอบสารเมลาโทนินแบบหยดทดสอบ (Drop test) ผลการทดลองพบว่าชุดทดสอบที่พัฒนาขึ้นสามารถวัดค่าเมลาโทนิน ที่มีปริมาณต่ำสุดได้ถึง 0.15 นาโนกรัม/มิลลิลิตร โดยใช้เวลาในการวิเคราะห์รวมถึงการอ่านผลทั้งหมดเพียง 20 นาที จากผลการทดลองต่างๆ ในการศึกษานี้ได้ชี้ให้เห็นแล้วว่าแนวความคิดในการสร้างชุดตรวจเมลาโทนินแบบหยดทดสอบสามารถทำได้จริงและมีศักยภาพที่ควรจะได้รับการพัฒนาต่อยอดต่อไปเพื่อให้ได้ชุดทดสอบที่ให้ผลเร็ว ใช้งานง่าย และมีราคาถูก
ไม่มีรายการทางกายภาพสำหรับระเบียนนี้
Click on an image to view it in the image viewer
There are no comments on this title.