การวิจัยและพัฒนาการทดสอบประสิทธิภาพและความปลอดภัยของสารออกฤทธิ์ทางเชิงหน้าที่เพื่อสร้างเสริมระบบภูมิคุ้มกันในโค = Research and development of functional ingredients for enhancing immune system in cattle and diary cows / Pattarawadee Kengkwasingh [et al.]
โดย: Pattarawadee Kengkwasingh
ผู้แต่งร่วม: Pattarawadee Kengkwasingh | Sarunya Laovitthayanggoon | Pataranapa Nimtrakul | Boonruksa Gussayakorn | Wipaporn Phatvej | Warakorn Songmung | ภัทรวดี เก่งกว่าสิงห์ | ศรัญญา เหล่าวิทยางค์กูร | ภัทรนภา นิ่มตระกูล | บุญรักษา กัสยากร | วิภาพร พัฒน์เวช | วรากร สองเมือง
ข้อมูลการพิมพ์: Pathumthani : Thailand Institute of Scientific and Technological Research, 2024 รายละเอียดตัวเล่ม: 76 p. : tables, ill. ; 30 cm.ชื่อเรื่องอื่นๆ: รหัสโครงการ : 6618301033หัวเรื่อง: จุลินทรีย์ | ระบบภูมิคุ้มกัน | โคสาระสังเขป: Functional ingredient from the TISTR Culture Collection at Thailand Institute of Scientific and Technological Research (TISTR) were used, which was cultured in yeast malt broth (YM Broth). Their heat killed supernatants at (75±1°C, 60 minutes) of M. koreensis at 109 CFU/ml were prepared from peptone water buffer to generate functional active ingredient. Moreover, sterile cell technique (110±1°C, 15 minutes)
also used to prepare the functional ingredients. Then, 18 samples of functional ingredient from both techniques were assessed cytotoxic evaluation on RAW 246.7 cell line. RAW 264.7 cells were treated with the test samples in the range of concentrations at 0.5%-50% (v/v) as well as the positive control (10% DMSO (v/v)), negative control (medium), and incubated in a 5% CO2 incubator at 37oC, exposed to the test samples for 24 h. After 24 h exposure time the cytotoxicity effects on the treated cells were determined quantity evaluation and compared with the control cells. A viability assay was conducted using 3-(4,5-dimethylthioazol-2-ly)-2,5-diphenyltetrazolium bromide which was well-known as MTT assay. The result showed that functional active ingredient of heat killed group at 50% concentrations did not show any cytotoxic activity compared with negative control while functional active ingredient of sterile group showed cytotoxic activity except Metschnikowia koreensis. Evaluation of nitric oxide production showed Kodamaea ohmeri from heat-killed cell presented the highest secretion at concentration 0.5% at 49.79±0.16%, however, Metschnikowia koreensis at 25% produced the lowest level only 18.70±0.52%. In sterile group, Pichia kudriavzevii (P24) at concentration 1% showed the highest level at 51.52±0.16%, while Hyphopichia homilentoma at concentration 0.5% produced the lowest level only 45.29±0.47%. Moving to percentage of phagocytic activity, functional ingredient from heat-killed cell (Starmeralla sorbosivorans) secreted the biggest level at 200.34±5.75%. In contrast, Pichia kudriavzevii at concentration 2% produced the lowest only 123.22±2.09%. Moreover, sterile cell from Pichia kudriavzevii (P21) at concentration 0.5% produced the highest phagocytic activity 167.46±2.32%, whereas Pichia kudriavzevii (P24) at 12.5% produced the lowest phagocytic activity at 100.00±2.41%. In positive control group (beta-glucan) at 50 µg/ml showed percentage of phagocytic activity at 235.67±3.00%. Evaluation of cytokine secretions (IL-6 and TNFalpha) have found Saccharomyces cerevisiae at 50% from Heat-killed cellthat produced the highest TNF-alpha level at 9.23±0.75 ng/ml, while Metschnikowia koreensis in steriled cell group at 50% showed 9.08±0.80 ng/ml. Determination of Interleukin 6 showed Pichia kudriavzevii (Heat-killed cell) at 25% presented 60.67±0.57 ng/ml, whereas Pichia kudriavzevii (P24) from steriled cell at 4% presented 68.87±0.76 ng/mlสาระสังเขป: สารออกฤทธิ์เชิงหน้าที่จากจุลินทรีย์ ได้จากศูนย์จุลินทรีย์ สถาบันวิจัยวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยีแห่งประเทศไทย นำมาเพาะเลี้ยงในอาหารเลี้ยงเชื้อแบบเหลว ชนิด YM broth ให้มีความเข้มข้นของเซลล์ 109 โคโลนี/มิลลิลิตร จากนั้นเตรียมสารออกฤทธิ์เชิงหน้าที่จากเชื้อจุลินทรีย์ด้วยความร้อน (Heat killed cell) อุณหภูมิ 75±1 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 60 นาที และเซลล์ตายด้วยการฆ่าเชื้อ (Steriled cell) ที่อุณหภูมิ 110±1 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 15 นาที ใน Peptone water buffer ประเมินความปลอดภัยเบื้องต้นในหลอดทดลอง ด้วยวิธี MTT assay โดยใช้เซลล์แมคโครฟาจความเข้มข้น 2x105 เซลล์/มิลลิลิตร ที่เตรียมในจานเพาะเลี้ยง จำนวน 96 หลุม โดยทำการทดลอง 3 ซ้ำ ทดสอบกับตัวอย่างทดสอบสารออกฤทธิ์เชิงหน้าที่ทั้ง 18 ตัวอย่าง ที่กรองด้วย syringe filter 0.2 ไมโครเมตร และเจือจางในช่วงระดับความเข้มข้น 0.5-50% (ปริมาตร/ปริมาตร) ซึ่งสารละลายควบคุมเชิงบวก (Positive control) ในการทดสอบความเป็นพิษต่อเซลล์ คือ 10% (ปริมาตร/ปริมาตร) DMSO ในอาหารเลี้ยงเซลล์ สารละลายควบคุมเชิงลบคือ อาหารเลี้ยงเซลล์ ซึ่งปริมาตรของตัวอย่างทดสอบ สารละลายควบคุมคือ 100 ไมโครลิตร โดยแต่ละกลุ่มทำการทดสอบ 3 ซ้ำ จากผลการทดสอบตัวอย่างทดสอบที่ระดับความเข้มข้น 50% พบว่า ในกลุ่มตัวอย่างทดสอบที่เตรียมด้วยวิธีเซลล์ตายด้วยความร้อน (Heat-killed cell) มีการรอดชีวิตสูงกว่า 70% ซึ่งไม่มีความเป็นพิษต่อเซลล์ในขณะที่ตัวอย่างทดสอบที่เตรียมด้วยวิธี เซลล์ตายด้วยการฆ่าเชื้อ (Steriled cell) มีการรอดชีวิตต่ำกว่า 70% ซึ่งมีความเป็นพิษต่อเซลล์ มีเพียงสารออกฤทธิ์เชิงหน้าที่จาก Metschnikowia koreensis ที่มีการรอดชีวิตสูงกว่า 70% ในระดับความเข้มข้น 50% สำหรับการทดสอบการวัดปริมาณไนตริกออกไซด์พบว่า สารออกฤทธิ์เชิงหน้าที่ที่เตรียมจากจุลินทรีย์ด้วยวิธี วิธีเซลล์ตายด้วยความร้อน (Heatkilled cell) Kodamaea ohmeri ระดับความเข้มข้น 0.5% พบว่ามีปริมาณไนตริกออกไซด์สูงที่สุดถึง 49.79±0.16% ในทางกลับกัน Metschnikowia koreensis ที่ระดับความเข้มข้น 25% พบว่ามีปริมาณไนตริกออกไซด์น้อยที่สุดเพียง 18.70±0.52% เซลล์ตายด้วยการฆ่าเชื้อ (Steriled cell) พบว่า Pichia kudriavzevii (P24) ระดับความเข้มข้น 1% พบว่ามีปริมาณไนตริกออกไซด์สูงที่สุด 51.52±0.16% ในขณะที่ Hyphopichia homilentoma ระดับความเข้มข้น 0.5% พบว่ามีปริมาณไนตริกออกไซด์ต่ำที่สุด 45.29±0.47% การทดสอบ %phagocytic activity ของสารออกฤทธิ์เชิงหน้าที่ที่เตรียมจากจุลินทรีย์ด้วยวิธีเซลล์ตายด้วยความร้อน (Heat-killed cell) Starmeralla sorbosivorans ระดับความเข้มข้น 12.5% พบว่ามี phagocytic activity ถึง 200.34±5.75% ในทางกลับกัน Pichia kudriavzevii ระดับความเข้มข้น 2% พบว่ามีปริมาณ %phagocytic activity ต่ำที่สุด 123.22±2.09% สรุปได้ว่าสารออกฤทธิ์เชิงหน้าที่ที่เตรียมจากจุลินทรีย์ด้วยเซลล์ตายด้วยการฆ่าเชื้อ (Steriled cell) Pichia kudriavzevii (P21) ระดับความเข้มข้น 0.5% พบว่ามีปริมาณ phagocytic activity 167.46±2.32% ในทางกลับกัน Pichia kudriavzevii (P24) ระดับความเข้มข้น 12.5% พบว่ามีปริมาณ phagocytic activity ต่ำที่สุด 100.00±2.41% ในขณะที่ กลุ่มควบคุมบวก (beta-glucan) 50 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร มีปริมาณ phagocytic activity 235.67±3.00% ในการตรวจวัดปริมาณไซโตไคน์ พบว่า วิธีเซลล์ตายด้วยความร้อน (Heat-killed cell) ระดับการสร้างปริมาณ TNF-alpha ของสารออกฤทธิ์เชิงหน้าที่จากจุลินทรีย์ Saccharomyces cerevisiae (TISTR 5161) พบว่ามีปริมาณ TNF-alpha สูงที่สุดที่ระดับความเข้มข้น 50% คือ 9.23±0.75 นาโนกรัม/มิลลิลิตร ในขณะที่ Pichia kudriavzevii ที่ระดับความเข้มข้น 25% พบว่ามีปริมาณ TNF-alpha น้อยที่สุดเพียง 2.60±0.36 นาโนกรัม/มิลลิลิตร สำหรับตัวอย่างทดสอบที่เตรียมด้วยวิธีเซลล์ตายด้วยการฆ่าเชื้อ (Steriled cell) พบการสร้าง TNF-alpha ของสารออกฤทธิ์เชิงหน้าที่จากจุลินทรีย์ Metschnikowia koreensis ที่ระดับความเข้มข้น 50% คือ 9.08±0.80 นาโนกรัม/มิลลิลิตร ในขณะที่ Meyerozyma caribbica ที่ระดับความเข้มข้น 6.25% พบว่ามีปริมาณ TNFalpha น้อยที่สุดเพียง 2.50±0.30 นาโนกรัม/มิลลิลิตรในส่วนของการสร้าง IL-6 พบว่า วิธีเซลล์ตายด้วยความร้อน (Heat-killed cell) ระดับการสร้างปริมาณ IL-6 ของสารออกฤทธิ์เชิงหน้าที่จากจุลินทรีย์ Pichia kudriavzevii ที่ความเข้มข้น 25% คือ 60.67±0.57 นาโนกรัม/มิลลิลิตร ในขณะที่ Hyphopichia homilentoma ที่ระดับความเข้มข้น 50% พบว่ามีปริมาณ IL-6 น้อยที่สุดเพียง 6.09±0.11 นาโนกรัม/มิลลิลิตร สำหรับตัวอย่างทดสอบที่เตรียมด้วยวิธี เซลล์ตายด้วยการฆ่าเชื้อ (Steriled cell) พบการสร้าง IL-6 ของสารออกฤทธิ์เชิงหน้าที่จากจุลินทรีย์ Pichia kudriavzevii (P24) ที่ระดับความเข้มข้น 4% คือ 68.87±0.76 นาโนกรัม/มิลลิลิตร และสารออกฤทธิ์เชิงหน้าที่จากจุลินทรีย์ Hyphopichia homilentoma พบว่ามีการสร้าง IL-6 น้อยที่สุด คือ 46.35±0.40 นาโนกรัม/มิลลิลิตร
ไม่มีรายการทางกายภาพสำหรับระเบียนนี้
There are no comments on this title.