การปรับปรุงพันธุ์สบู่ดำทนแล้งระดับโมเลกุล เพื่อปลูกในพื้นที่เสื่อมโทรม = Molecular breeding of drought-tolerant jatropha curcas for cultivation in degraded areas / Rujira Deewatthanawong [et al.] (CONFIDENTIAL)
ผู้แต่งร่วม: รุจิรา ดีวัฒนวงศ์
| Rujira Deewatthanawong | บวร ตันติวรชัย | สุภาวดี ชนะพาล | มนฑิณี กมลธรรม | ชุติมา สารทจีนพงษ์ | พรจรัส สิงหวรชัย | Borworn Tontiworachai | Supavadee Chanapan | Montinee Kamoltham | Chutima Satjeenpong | Pornjarus Singhavorachai
TRM: พลังงานและสิ่งแวดล้อม Language: Thai ชื่อชุด: Res. Proj. no. 57-22, Sub Proj. no.1; no.1 (Final report) (CONFIDENTIAL)ข้อมูลการพิมพ์: Pathumthani Thailand Institute of Scientific and Technological Research 2018 รายละเอียดตัวเล่ม: 78 p. tables, ill. 30 cm.ชื่อเรื่องอื่นๆ: การปรับปรุงพันธุ์สบู่ดำทนแล้งระดับโมเลกุลเพื่อปลูกในพื้นที่เสื่อมโทรมหัวเรื่อง: สบู่ดำ | พืชน้ำมัน | ไบโอดีเซลสาระสังเขป: Jatropha curcas is one of plant oil species that can be used to produce high-quality biodiesel fuel. In this study, gene expression analysis of drought stress related genes in J. curcas including PIP (plasma membrane intrinsic protein), NAC transcription factor (NAM, ATAF, and CUC), DREB1A (dehydration responsive element binding protein 1A) and ZEP (zeaxanthin epoxidase) genes were analyzed by quantitative real-time PCR. Strong induction of DREB1A gene was observed under drought stress conditions. The DREB1A gene was then further cloned and sequenced. The DREB1A clone was isolated from drought stressed J. curcas using reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) and 5'-3' rapid amplification of cDNA end (5'-3' RACE). The full length of DREB1A contained 678 bp open reading frame (ORF), translated for 225 amino acids. The nucleotide and amino acid sequences showed 99% sequence identity with the J. curcas DREB1A gene (accession number XM012234936.1) and the J. curcas DREB1A protein (accession number XP012090326.1), respectively. The NcoI and SpeI restriction sites were then added to the 5' and 3' ends of the DREB1 gene by PCR technique. The DREB1A fragment was cloned into the pCAMBIA1305.1 between CaMV35S promoter and NOS terminator in the positions of NcoI and SpeI restriction sites. Protocols for callus initiation, plantlet regeneration, and transformation were also developed. The recombinant pCAMBIA-DREB1A construct was transformed into Agrobacterium tumefaciens strain EHA105, and used for Agrobacterium mediated stable transformation of J. curcas plants. สาระสังเขป: สบู่ดำ (Jatropha curcas) เป็นพืชน้ำมันชนิดหนึ่งที่ใช้ในการผลิตไบโอดีเซล งานวิจัยนี้ทำการศึกษาการแสดงออกของยีนที่ตอบสนองต่อภาวะขาดน้ำของสบู่ดำโดยทำการศึกษายีน PIP (plasma membrane intrinsic protein) NAC transcription factor (NAM, ATAF, and CUC) DREB1A (dehydration responsive element binding protein 1A) และ ZEP (zeaxanthin epoxidase) ด้วยวิธี quantitative real-time PCR ผลการวิจัยพบว่ายีน DREB1A มีการตอบสนองต่อภาวะการขาดน้ำมากที่สุด ยีน DREB1A จึงถูกคัดเลือกมาทำการโคลนและวิเคราะห์ลำดับเบส โคลนของยีน DREB1A ถูกทำการคัดแยกมาจากสบู่ดำที่ทำการงดน้ำด้วยวิธี Reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) และ 5'-3' rapid amplification of cDNA end (5'-3' RACE) จากการวิเคราะห์ลำดับเบสพบว่าลำดับเบสที่สมบูรณ์ของยีน DREB1A ประกอบด้วย 678 คู่เบส ซึ่งสามารถแปลเป็นโปรตีนที่มีลำดับกรดแอมิโนได้ 225 ตัว ลำดับเบสและลำดับกรดแอมิโนที่วิเคราะห์ได้มีความเหมือนที่ระดับ 99 เปอร์เซ็นต์ กับลำดับเบสของ J. curcas DREB1A gene (accession number XM012234936.1) และลำดับกรดแอมิโนของ J. curcas DREB1A protein (accession number XP012090326.1) ตามลำดับ นำยีนที่สมบูรณ์มาทำการเพิ่มตำแหน่งตัดจำเพาะของเอนไซม์ NcoI และ SpeI ที่ตำแหน่งปลาย 5' และ 3' ของยีนด้วยเทคนิค PCR ต่อมาทำการโคลนยีน DREB1A ที่ทำการเพิ่มตำแหน่งตัดจำเพาะที่ปลายทั้งสองด้านแล้วเข้าสู่เวกเตอร์ pCAMBIA1305.1 ที่ตำแหน่งตัดจำเพาะ NcoI และ SpeI ซึ่งอยู่ระหว่าง CaMV35S promoter และ NOS terminator. นอกจากนี้ งานวิจัยนี้ยังทำการพัฒนาวิธีการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อสำหรับการชักนำให้เกิดแคลลัส การชักนำให้เกิดต้นสมบูรณ์ และการส่งถ่ายยีนเข้าสู่พืช จากนั้นทำการส่งถ่ายเวกเตอร์ลูกผสม pCAMBIA-DREB1A เข้าสู่เซลล์แบคทีเรีย Agrobacterium tumefaciens สายพันธุ์ EHA105 เพื่อทำการส่งถ่ายยีนแบบถาวรเข้าสู่ต้นสบู่ดำในลำดับต่อไป.
| ชนิดของทรัพยากร | Location | Call number | สถานะ | Last seen | บาร์โค้ด |
|---|---|---|---|---|---|
|
Not For Loan | 2022-06-13 | IP00020 |
There are no comments on this title.